【产品名称】

  通用名称：即用MH琼脂培养基（KB法）

  英文名称：Mueller-Hinton Agar

【包装规格】

【预期用途】

适用于用于普通细菌KB法扩散药敏试验。 

【检验原理】

将含有定量抗菌药物的纸片，贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后，不断向纸片周围扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

 【主要组成成份】

    由琼脂培养基和一次性塑料培养皿组成。
每1000mL琼脂含：

酸水解酪蛋白         17.5g

牛肉浸出粉         2.0g

可溶性淀粉         1.5g

琼脂               17.0g

【储存条件及有效期】
　　2℃～8℃保存，切勿冻藏。

在储存条件下，保质期60天，开封后即时使用，开封后即时使用。

【适用仪器】

   无

【样本要求】

样本必须是0.5麦氏比浊标准的细菌悬液。

细菌悬液可通过生长法或直接菌落悬液法制备。

1、 生长法：

（1） 从琼脂平板上选取至少3-5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部后将细菌转移到含4-5 ml适宜的肉汤培养管（如胰酶消化大豆肉汤）中。 

（2） 将此肉汤培养物置35℃孵育至其浊度等于或超过0.5麦氏标准（通常需2-6h）。

（3） 用无菌盐水或肉汤，将旺盛生长的肉汤培养基的浊度调整到光学上相当于0.5麦氏标准。

2、 直接菌落悬液法：

此法为生长法的简便替代方法，从孵育18-24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用肉汤或盐水制成悬液作为接种物，然后按上述方法将浊度调整至0.5麦氏标准。

【检验方法】

1. 将培养基复温至常温25℃；

2. 在接种物制备后15分钟内接种：用无菌棉拭蘸取菌液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周；

3. 接种好的平板，可敞开盖子倒置在室温下干燥3-5分钟；

4. 在15分钟之内，用纸片分配器或无菌镊子，将纸片放入琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各纸片中心相距应大于24mm，至多放置6-7个纸片；

5. 应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35℃孵箱，若超过15分钟将使纸片中的抗菌药物提早扩散；

6. 必须孵育24小时以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性，其他的非苛养菌可在孵育16-18小时后读取结果。如果接种正确，抑菌圈呈透明圆环状，菌苔生长的平面应该是均匀连续的，如出现明显的单个菌落生长说明接种菌的浓度太低，应重新进行试验。

注：

1、 由于某些药物在纸片放入琼脂平板后几乎立即扩散，所以一旦纸片放入后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的另一位置。

【参考值（参考范围）】

培养基接种质控菌株，培养24h后用游标卡尺测量，

【检验结果的解释】

用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。

根据CLSI标准，作出“敏感”,“

耐药”和“中介”的判断。

l “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制；

l “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临床治疗无效。

l “中介”者提示该细菌对常规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于敏感株，使用高于正常给药量有疗效。 

注意：

1、 抑菌圈的直径（包含纸片的直径）可用直尺或游标卡尺测量，读取最近的整毫米数。

2、 测量时将尺子放在倒置的平板上，置平板在黑色无反射背景上方几寸处并用反射光照明。

【检验方法的局限性】

1、 只应用于快速生长菌，不可用于缓慢生长菌、需要增加CO₂浓度的挑剔性细菌和厌氧性细菌；

2、 必须加以标准化进行试验，如：纸片抗生素的浓度、样本的浊度等。

【产品性能指标】

培养基接种质控菌株，生长情况应符合下表要求：